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작성일 23-12-17 09:37

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2. Introduction

Plasmid DNA 분리의 원리
주로 mini-prep이라고 부르는 이 방법은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법이다. 가장 보편적으
로 사용되는 방법인 Alkali lysis method이다. 세포벽을 군데군데 무너뜨리는 물질은 EDTA이며, 이때…(skip)

3. pH를 급격히 7.0까지 복구시키면 크기가 작고 supercoiled form을 유지하고 있던 plasmid는 비교적 renaturation이 잘 되지만, chromosomal DNA는 미처 renature되지 못하고 엉기게 된다 이렇게 엉긴 chromosomal DNA를 원심분리로 제거한다.
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실험과제/전기전자


순서




Plasmid 분리 實驗 & Agarose gel을 이용한 plasmid 전기영동

1. Purpose

E.coli를 배양해 플라스미드를 분리하고, 분리한 플라스미드를 직접 만든 Agarose gel을 이용하여
전기 영동한다. 기본적인 원리는 그림에서 보듯이 세균의 cell wall과
cell membrane을 부수고 DNA 만을 분리하는 것이다. 이 때 세포막은 유지되도록 한다. 이 때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는
chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것이다. 그러면 상층액에 plasmid DNA가 있게 된다





다. 다행히 chromosomal DNA는 분리 과정에서
linear 형태가 되고 크기가 상당히 크기 때문에 이런 성질의 차이를 이용하면 분리할 수 있따 Alkali
lysis method 의 the gist 원리는 다음과 같다.
1. 세포벽을 깬다. 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이
비슷하기 때문에 구분하여 분리하기가 쉽지 않다.
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