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단백질 분리와 전기 영동

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작성일 23-08-11 23:46

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레포트/공학기술

1. 단층으로 자란 배양세포를 1 ml의 PBS로...
experiment(실험)방법

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,공학기술,레포트

설명
단백질 분리와 전기 영동

순서

1) 전체 세포단백질(whole cellular extract)의 분리

test(실험) 방법

1. 단층으로 자란 배양세포를 1 ml의 PBS로 두번 세척한다. 이 용액은 SDS-PAGE에 이용할 수 있따

2) 핵단백질(nuclear extract)의 분리
핵단백질의 분리는 1단계의 핵분리과정과 2단계의 단백질 분리과정으로 나눌 수 있으며, 핵을 분리하는 방법에 따라서 여러가지 방법이 있따 순수한 핵단백질을 원하는 경우 핵분리를 순수하게 해야 하지만 시간과 노력이 많이 들기 때문에 여러가지 세포에서 동…(생략(省略))

1) 전체 세포단백질(whole cellular extract)의 분리실험방법1. 단층으로 자란 배양세포를 1 ml의 PBS로... , 단백질 분리와 전기 영동공학기술레포트 ,

1) 전체 세포단백질(whole cellular extract)의 분리
다.

6. 상층액(세포단백질)을 새 미세원침관으로 옮긴다.

3. 30분간 가끔씩 흔들면서 얼음에 둔다.

2. 배양접시에 붙은 상태로 얼음에 올려놓고 300 ml의 용해용액(RIPA 용액: 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.5% DOC[deoxycholic acid], 0.1% SDS, 50 mM Tris-Cl, pH 7.5)을 가한다.

4. 1 ml pipette을 사용하여 수차례(次例)에 걸쳐 lysate를 올렸다, 내렸다를 반복하여 뻑뻑하지 않을 때까지 시행하면 genomic DNA가 모두 shearing 되었다고 볼 수 있따

5. 이 용액을 미세원침관으로 옮기고 4°C,15,000 rpm에서 10분간 원심분리한다.

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