일반생물학 실습 - immunohistochemistry와 위 양성反應(반응) 경로 차단
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작성일 23-04-05 08:29
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이렇게 實驗이 진행되는 과정에서 두 가지 위 양성경로를 생각할 수 있따
이런 두 가지 경로를 막기 위해 이번 實驗에서는 ①Quenching 과 ②Block이라는 과정을 거친다.
순서
① Quenching(담그는 과정)
면역조직화학- 조직이나 세포내의 특정 항원을 항체로 표시 후 관찰하는 기술. † 실험 목적 1) 항체반응을 이용하여 신경세포를 염색해본다.
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Hydrogen peroxide – Quenching을 통해 조직 내에 있는 과산화소체에 의한 위 양성反應을 막고, 후에 DAB를 산화시켜 염색하는 역할.
1) 항체反應(반응)을 이용하여 신경세포를 염색해본다.
† 實驗 하기 전에
항체 – Primary antibody – Mouse Anti-GFAP antibody(Ig G)
2) test(실험) 을 준비하는 과정에서 위 양성反應(반응)의 경로를 생각하고 차단하는
이 實驗에서는 hydrogen peroxide 0.3%용액에 약 15분간 담가 세포 내의 과산화소체가 제 역할을 못하게 만든다.
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Secondary antibody – Goat Anti-mouse Ig G antibody
Normal goat serum – 세포막에서 나타날 수 있는 위 양성反應 경로 차단
† test(실험) 목적
일반생물학 실습 - immunohistochemistry와 위 양성反應(반응) 경로 차단
Cryotomy – 절편을 위해
DAB – 염색물질. 발암물질이다.
† 준비물
세포 표면에 있는 Fc 수용체가 2차 항체의 Fc부분과 맞아떨어져 다른 세포가 염색이 되는 경우.
false positive reaction – 양성이 아님에도 나타남.
세포 내에 있는 과산화소체에 의해 표적세포가 아닌 다른 세포까지 염색이 되는 경우.
위 實驗은 표적세포에서만 발견되는 단백질에 1차 항체를 붙이고, 그 1차 항체에 2차 항체를 붙인 후, 2차 항체에 붙어있는 peroxidase에 의해 DAB가 H₂O₂와 反應하여 갈색으로 염색되는 實驗이다. 2) 실험을 준비하는 과정에서 위 양성반응의 경로를 생각하고 차단하는 설계를 배운다.
다.
일반생물학 실습,immunohistochemistry,위 양성반응 경로 차단
PBS – 조직을 씻거나 조직을 담굴 용액을 희석시킬 때 사용.
면역조직화학- 조직이나 세포내의 특정 항원을 항체로 표시 후 觀察(관찰) 하는 기술.
설명
설계를 배운다.
