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[자연과학] 미생물實驗(실험) - Gram(그람) 염색

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작성일 23-08-22 12:38

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그러나 너무 오래 탈색하거나 old culture된 세균은 거의 Gram 음성균으로 나타나기 쉬우므로 특히 탈색에 주의하여야 한다.

⑤ Safranin으로 재염색, 세척을 거친 뒤에 슬라이드 글라스는 육안으로 플레이트를 보았을 때 가장자리 쪽에 보라색인 부분이 보이며, 가운데 균이 놓인 부분은 주로 빨간색을 띠고 있다 하지만 색이 진하지는 않고 투명하다.

② 백금이는 시료를 뭍이기 전에 불에 달구어 멸균한 뒤 공기에 식혀 사용하는데, 균 배지에 대보아 식은 것을 확인하고 도말한다.

④ 에탄올을 떨어뜨리자 순식간에 색이 투명해지면서 탈색되었다.

① 첫 번째 표본- 빨간색으로 염색이 잘 되지 않아 균을 찾을 수 없었으며, 솔잎처럼 생긴 수많은 선들을 보았다.

2. 재료, 시약, 기구

Escherichia coli (gram 음성간균), Staphylococcus aureus (gram 양성구균), Crystal violet(1차 염색제), Gram iodine(착색제), 95% ethanol(탈색제), Safranin(2차 염색제), 슬라이드 글라스, 백금이, 멸균증류수, 알코올램프, 일회용장갑, 피펫, 초시계 등

3. test(실험) 방법

① 도말- 슬라이드글라스에 멸균 증류수 한 방울을 떨어뜨리고 균(E.coli)을 백금이로 취해서 도말

② Air Dry- 약한 불꽃 위에서 표본을 좌우로 흔들면서 건조시킴

③ Fixing- 도말면을 위로 하여 약한 불꽃 중에서 3번 정도 서서히 통과

④ Straining- Crystal violet을 떨어뜨리고 1분간 방치하여 보라색으로 염색

⑤ Washing- 도말면을 아래로 하여 약하게 물을 틀어 염색액이 묻어나오지 않을 때까지 세척한 뒤 물기를 제거

⑥ Coloring- Gram iodine을 떨어뜨리고 1분간 방치하여 색을 착색시킴

⑦ Washing- 위와 동일한 방법으로 세척한 뒤 물기를 제거

⑧ Decolorizing- 95% ethanol을 떨어뜨리고 5~10초간 방치하여 탈색

⑨ Washing

⑩ Straining- Safranin을 떨어뜨리고 1분간 방치하여 재염색

⑪ Washing- 30초를 넘기지 말 것

⑫…(skip)

4. 결과

① 도말을 했을 때, 슬라이드 글라스의 증류수 색이 불투명한 색으로 change(변화)하였다. 그렇지 않으면 글라스 표면에 흠집이 생겨 균을 觀察하기 힘

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실험과제/생물의학

다.

② 두 번째 표본- 색이 잘 나타나지 않아 균을 볼 수 없었다.

③ 세 번째 표본- 붉은 색의 동글동글한 것들이 모여서 붙어있는 것을 볼 수 있었다. 또 균을 증류수에 풀 때는, 힘을 주지 말고 약하게 해야 한다.

③ 요오드를 떨어뜨리고 세척한 후 ②의 상태와 차이가 없다.

② Crystal violet으로 염색하고 세척하자 균이 있는 부분은 청남색을 띤다. 백금이를 사용 후에는 안전을 위하여 멸균하여 보관한다.
∞ 세균의 세포벽에 착색된 crystal violet이 탈색제에 의해 저항성을 나타내어 보라색을 띠면 양성균이라 하고, crystal violet이 탈색된 후 대조 염색제인 safranin으로 염색되어 빨간색을 띠는 것을 음성균이라 한다.

5. 고찰

① 도말할 때에 증류수는 균을 풀기 위해 사용하는 것인데, 이때 증류수의 양이 너무 많으면 나중에 건조시키기 어려우므로 딱 한 방울만을 떨어뜨리도록 한다. 양성균 세포벽에는 teichoic acid가 존재하여 탈색제로부터 보호 작용을 하여 crystal violet이 남아있게 된다된다.

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설명

식품 미생물 및 test(실험) - Gram 염색

1. test(실험) 목적 및 원리

∞ 균을 염색하여 색깔로 Gram 양성균과 음성균을 구분한다.

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